Teknolojia ya FRET peptide

Uhamisho wa Nishati ya Fluorescence (FRET)

Uhamisho wa nishati ya resonance ya Fluorescence (FRET) ni mchakato wa uhamishaji wa nishati isiyo na mionzi ambapo nishati ya hali ya msisimko wa wafadhili huhamishiwa kwa hali ya msisimko wa kipokeaji kupitia mwingiliano wa wanandoa wa umeme kati ya molekuli.Utaratibu huu hauhusishi fotoni na kwa hivyo sio mionzi.Jaribio hili lina faida za kuwa haraka, nyeti na rahisi.

Rangi iliyotumiwa katika jaribio la FRET inaweza kufanana.Lakini katika matumizi mengi, rangi tofauti hutumiwa kweli.Kwa kifupi, uhamisho wa nishati ya mwanga wa resonance ni uhamisho wa jozi ya dipoles kutoka kwa wafadhili (rangi 1) hadi kwa kukubali (rangi 2) wakati kikundi cha wafadhili kinasisimua.Kwa ujumla, wigo wa utoaji wa kundi la Wafadhili wa fluorophore hupishana na wigo wa ufyonzaji wa kikundi cha Wapokeaji."Wakati umbali kati ya fluorophores mbili inafaa (10 - 100 A), uhamishaji wa nishati ya fluorophore kutoka kwa wafadhili hadi kwa anayekubali unaweza kuzingatiwa."Njia ya uhamishaji wa nishati inategemea muundo wa kemikali wa kipokezi:

1. Inabadilishwa kuwa vibration ya molekuli, yaani, mwanga wa mwanga wa uhamisho wa nishati hupotea.(Kipokezi ni kizima mwanga)

2. Utoaji hewa huo ni mkali zaidi kuliko kipokezi chenyewe, na hivyo kusababisha mabadiliko katika wigo wa pili wa fluorescence.”(Vipokezi ni vitoa mwangaza).

Kikundi cha wafadhili (EDANS) na jeni kipokeaji (DABCYL) zimeunganishwa kwa usawa kwenye substrate asilia ya protease ya VVU, na wakati substrate haijatenganishwa, DABCYL inaweza kuzima EDANS na kisha isiweze kugunduliwa na florini.Baada ya kukatwa kwa protease ya HIV-1, EDANS haizimiki tena na DABCYL, na EDANS luciferasi inaweza baadaye kugunduliwa.Upatikanaji wa vizuizi vya protease unaweza kufuatiliwa na mabadiliko katika nguvu ya fluorescence ya EDANS.

Peptidi za FRET ni zana rahisi za kusoma kutokubainisha peptidase.Kwa kuwa mchakato wa mmenyuko wake unaweza kufuatiliwa kila mara, hutoa njia rahisi ya kugundua shughuli za kimeng'enya.Mwangaza unaozalishwa baada ya hidrolisisi ya vifungo vya peptidi na mtoaji/mpokeaji hutoa kipimo cha shughuli ya kimeng'enya katika viwango vya nanomolar.Wakati peptidi ya FRET ikiwa nzima, inaonyesha kutoweka kwa ghafla kwa mwako wa ndani, lakini dhamana yoyote ya peptidi iliyo kinyume na mtoaji/kipokezi inapovunjika, hutoa mwako, ambao unaweza kutambuliwa kwa kuendelea na shughuli ya kimeng'enya inaweza kuhesabiwa.